Medidas de Volume - Pipeta Volumétrica

Procedimento de utilização da pipeta volumétrica.

Medidas de Volume - Pipeta Graduada

Procedimento de utilização da pipeta graduada.

Operação da Pera

Procedimento de operação da pera para sucção e escoamento de líquidos.

Escoamento Manual

Procedimento para o controle manual do escoamento em pipetas.

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Introdução

As pipetas volumétricas são também conhecidas como pipetas de bulbo ou pipetas de transferência. São vidrarias graduadas em milímetros utilizadas para transferir volumes conhecidos de líquidos. Os volumes pré-fixados podem ser, por exemplo, de 1mL, 2mL, 5mL, 10mL, 15mL, 20mL, 25mL, 50mL e 100mL, e estão indicados no equipamento como uma marca anelada na extremidade superior da pipeta. As pipetas volumétricas são instrumentos classe A/AS, que apresentam alta exatidão em medidas feitas a temperatura de 20°C - temperatura padrão de calibração do equipamento. São calibradas por vertido (TD, Ex), ou seja, para dar escoamento a determinados volumes, sendo que a quantidade de líquido vertido do instrumento corresponde ao volume impresso no instrumento. Podem ser de escoamento total (calibradas para que todo o conteúdo escoe da pipeta) ou de escoamento parcial (calibradas para que nem todo o volume seja escoado). O tempo de espera para escoamento do líquido pode ser nulo ou de 5s, apresentando este último limite de erro menor.

As pipetas volumétricas são constituídas por um tubo de vidro com um bulbo na parte central, onde constam nome do fabricante, volume nominal, limite de erro (varia dependendo da capacidade da pipeta volumétrica), temperatura de referência, tempo de espera e tipo de calibração. O traço de referência está demarcado na parte acima do bulbo. A extremidade inferior é afilada e o orifício é ajustado para evitar que o escoamento seja rápido demais, o que poderia levar a erros de medida.

As pipetas volumétricas de vidro podem ser reutilizáveis, podendo ser aquecidas em estufa de secagem ou de esterilização até 250°C, não provocando variação de volume. No entanto, um aquecimento irregular ou uma mudança brusca de temperatura provocam tensões térmicas que podem levar à quebra do vidro.

Princípio da técnica

A transferência de líquido de volumes conhecidos consiste em fazer a sucção do líquido, ajustar o menisco na marca de calibração, e posteriormente deixar escoar o líquido em outro recipiente. A sucção deve ser feita com auxílio de uma pera de sucção.

A pera de sucção gera uma pressão diferente da atmosférica (fecha o sistema e apresenta válvulas que permitam a retirada de ar de seu interior), que facilita a subida do líquido. Para que o líquido escoa, é necessário que o sistema seja aberto.

Aparato experimental

O aparato experimental para a transferência de volumes pré-determinados consiste dos seguintes componentes:

Pipeta volumétrica (ou pipeta de bulbo)

Pera de sucção (ou pipetador)

Procedimento

Acople a pera de sucção na extremidade superior da pipeta volumétrica (extremidade mais próxima da marca de calibração). Permita que o líquido suba até um pouco acima da marca de calibração. Descarte uma ou duas vezes o volume da pipeta para lavar e retirar traços de outros líquidos transferidos com o equipamento. Uma forma alternativa de lavar a pipeta sem gastar tanto volume de solução é acoplar a pera de sucção e permitir que o líquido alcance até aproximadamente um terço do bulbo. Leve cuidadosamente a pipeta a posição horizontal (evite que chegue à pera) e permita com movimentos circulatórios que o líquido percorra todo o bulbo. Volte a pipeta para a posição vertical e escoe.

Depois de lavada a pipeta, permita que o líquido suba até um pouco mais que a marca de calibração. Baixe a solução até o menisco na marca de calibração. Leve a pipeta até o recipiente em que o líquido deverá ser escoado. Mantenha a pipeta levemente inclinada (o mais próximo possível da vertical), encoste a parte inferior da pipeta na parede do recipiente e deixa o líquido escoar até que pare. Traga a pipeta agora para a posição vertical e aguarde mais alguns segundos até que o líquido escoe totalmente. As últimas gotas geralmente não escoam da pipeta e não devem ser sopradas.

Uma forma alternativa de permitir o escoamento do líquido da pipeta é retirar a pera de sucção e possibilitar o escoamento por gravidade. Para isso, acople a pera de sucção e permita que o líquido ultrapasse um pouco a marca de calibração. Retire a pera e rapidamente com o dedo indicador tampe a extremidade superior da pipeta. Permita que a solução escoe até o menisco destampando parcialmente a pipeta. Leve a pipeta até o recipiente onde o líquido será escoado e proceda como acima, retirando apenas o dedo da extremidade superior da pipeta.

Cuidados técnicos

Ao montar o aparato, verifique se a pera de sucção está bem acoplada. Não aperte forte demais para não quebrar o vidro.

Nunca fazer a sucção com a boca.

Cuidado ao levar a pipeta ao recipiente para onde o líquido será transferido para não bater a ponta da pipeta e quebrá-la.

Ao fazer esse caminho, mantenha a pipeta na posição vertical. Assim, evita-se que o líquido entre na pera de sucção.

A leitura de volume de líquidos claros deve ser feita pela parte inferior do menisco e a de líquidos escuros pela parte superior.

Logo depois de feita a transferência do líquido, lave a pipeta com água destilada ou deixe-a mergulhada em água até que possa lavá-la. Assim evita-se que a solução seque dentro da pipeta e deixe resíduos, tornando mais difícil sua limpeza.

Evite lavar com soluções básicas, pois são capazes de atacar o vidro. Uma solução de 5% (em massa) de NaOH, a 95°C, dissolve o vidro Pyrex a uma taxa de 9µm/h.

Cuidados com a segurança

Use o EPI: óculos de segurança, avental, luvas e calçados fechados.